Đại cương về sắc ký lỏng - Nguyễn Bá Hoài Anh

Nội dung text: Đại cương về sắc ký lỏng - Nguyễn Bá Hoài Anh

1. ÑAÏI CÖÔNG VEÀ SAÉC KYÙ LOÛNG TS. NGUYỄN BAÙ HOAØI ANH
2. SAÉC KYÙ (CHROMATOGRAPHY) LAØ PHÖÔNG PHAÙP TAÙCH DÖÏA TREÂN 2 QUAÙ TRÌNH * HAÁP PHUÏ * GIAÛI HAÁP PHUÏ XAÛY RA LIEÂN TUÏC GIÖÕA 2 PHA: * PHA TÓNH : THÖÔØNG LAØ RAÉN HOAËC LOÛNG * PHA ÑOÄNG : CHAÁT LOÛNG (MOÄT CHAÁT HOAËC HOÃN HÔÏP NHIEÀU CHAÁT)
3. KHI NOÁI VÔÙI CAÙC ÑAÀU DOØ (DETECTOR) PHÖÔNG PHAÙP CHO PHEÙP ÑÒNH TÍNH : DÖÏA VAØO THÔØI GIAN LÖU ÑÒNH LÖÔÏNG : DÖÏA VAØO CHIEÀU CAO HOAËC DIEÄN TÍCH PEAK
4. INJECTOR CHROMATOGRAPHY E S A H P E L I OB M STATIONARY PHASE STATIONARY DETECTOR tM tR1 tR2 tR3 tR4 Start
5. SÔ ÑOÀ KHOÁI CUÛA MOÄT MAÙY SAÉC KYÙ LOÛNG ÑÔN GIAÛN HEÄ ISOCRATIC : THAØNH PHAÀN DUNG MOÂI KHOÂNG ÑOÅI
6. SÔ ÑOÀ KHOÁI CUÛA MOÄT MAÙY SAÉC KYÙ LOÛNG (tt) CAÙC BOÄ PHAÄN CÔ BAÛN BAO GOÀM : NGUOÀÀN CUNG CAÁÁP PHA ÑOÄÄNG (MOBILE PHASE) : LAØØ BÌNH ÑÖÏNG PHA ÑOÄNGÄ HOAËËC DUNG MOÂI CHAÏYÏ MAÙÙY.
7. SÔ ÑOÀ KHOÁI CUÛA MOÄT MAÙY SAÉC KYÙ LOÛNG (tt) HEÄÄ THOÁNGÁ ÑIEÀÀU KHIEÅÅN AÙÙP SUAÁÁT HOAËCË TOÁÁC ÑOÄÄ DOØØNG PHA ÑOÄÄNG, COØNØ GOÏIÏ LAØØ HEÄÄ THOÁÁNG CUNG CAÁÁP DUNG MOÂI : LC PUMP. BAO GOÀMÀ HEÄÄ ISOCRATIC (ÑAÚÚNG THAØNHØ PHAÀÀN) VAØØ HEÄÄ GRADIENT (THAØØNH PHAÀÀN PHA ÑOÄNGÄ THAY ÑOÅÅI TRONG QUAÙÙ TRÌNH CHAÏÏY)
8. SÔ ÑOÀ KHOÁI CUÛA MOÄT MAÙY SAÉC KYÙ LOÛNG (tt) VAN BÔM MAÃU (INJECTION VALVE): GOÀÀM LOAÏIÏ BÔM TAY VAØØ HEÄÄ THOÁÁNG BÔM MAÃU TÖÏ ÑOÄÄNG
9. SÔ ÑOÀ KHOÁI CUÛA MOÄT MAÙY SAÉC KYÙ LOÛNG (tt) LOØØ COÄÄT (COLUMN OVEN) : DUØØNG ÑEÅÅ ÑIEÀUÀ KHIEÅÅN NHIEÄÄT ÑOÄÄ COÄÄT TAÙÙCH COÄÄT TAÙCHÙ : LAØØ NÔI XAÛÛY RA CAÙÙC QUAÙÙ TRÌNH TAÙÙCH CHAÁÁT. GOÀÀM COÄÄT PHAÂN TÍCH VAØØ COÄÄT BAÛÛO VEÄÄ
10. SÔ ÑOÀ KHOÁI CUÛA MOÄT MAÙY SAÉC KYÙ LOÛNG (tt) ÑAÀU DOØ (DETECTOR): COÙ NHIEÀU LOAÏI KHAÙC NHAU TUØY THEO MUÏC ÑÍCH PHAÂN TÍCH. DUØNG ÑEÅ PHAÙT HIEÄN CHAÁT VAØ ÑÒNH LÖÔÏNG : UV-VIS, HUYØNH QUANG, ÑOÄ DAÃN, ÑIEÄN HOÙA, KHOÁI PHOÅ
11. SÔ ÑOÀ KHOÁI CUÛA MOÄT MAÙY SAÉC KYÙ LOÛNG (tt) HEÄ THOÁNG GHI NHAÄN VAØ XÖÛ LYÙ TÍN HIEÄU (INTERFACE, SOFTWARE, PC) : DUØNG ÑEÅ THU THAÄP VAØ TÍNH TOAÙN CAÙC KEÁT QUAÛ.
12. Injector Column Mobile phase Detector tM tR2 tR3 tR4 tR1 Start
13. NGUYEÂN TAÉC CUÛA BÔM SAÉC KYÙ LOÛNG - Goàm 2 valve moät chieàu : + Moät valve moät chieàu vaøo, chæ cho pheùp dung moâi vaøo ñaàu bôm. Khoâng cho dung moâi ra. + Moät valve moät chieàu ra, chæ cho pheùp dung moâi ra khoûi bôm, khoâng cho dung moâi vaøo. + Heä thoáng bôm piston chính xaùc ñieàu khieån baèng moâ tô böôùc (step moâ tô)
14. HEÄ THOÁNG LOAÏI NHIEÃU CUÛA BÔM DUAL PISTON -Nhieãu bôm seõ laøm taêng nhieãu neàn do piston di chuyeån seõ taïo xung doøng. - Giaûm nhieãu baèng hai caùch : + Dung dòch bôm qua moät oáng ñöôøng kính nhoû ñeå giaûm xung. + Thay ñoåi keát caáu baùnh raêng, söû duïng bôm keùp ñeå piston di chuyeån nheï vaø ít nhieãu.
15. HEÄ THOÁNG GRADIENT GRADIENT TRONG SAÉC KYÙ LOÛNG LAØ GÌ ? -LAØ SÖÏ THAY ÑOÅI THAØNH PHAÀN PHA ÑOÄNG TRONG QUAÙ TRÌNH CHAÏY THEO NHÖÕNG ÑÒNH HÖÔÙNG CUÏ THEÅ MUÏC ÑÍCH : NHAÈM TAÊNG CÖÔØNG KHAÛ NAÊNG TAÙCH CUÛA CAÙC CHAÁT TREÂN COÄT. NGUYEÂN NHAÂN : + NHIEÀU CHAÁT KHOÂNG THEÅ TAÙCH ÑÖÔÏC TREÂN COÄT TAÙCH VÔÙI MOÄT THAØNH PHAÀN PHA ÑOÄNG (DO TÖÔNG TAÙC CUÛA CAÙC CHAÁT CAÀN TAÙCH VÔÙI PHA ÑOÄNG VAØ PHA TÓNH GIOÁNG NHAU) + NEÁU THAY ÑOÅI THAØNH PHAÀN PHA ÑOÄNG : TÖÔNG TAÙC GIÖÕA CHAÁT PHAÂN TÍCH VAØ PHA TÓNH, PHA ÑOÄNG SEÕ THAY ÑOÅI. VÌ VAÄY SEÕ TAÙCH ÑÖÔÏC CAÙC CHAÁT.
16. HEÄ THOÁNG GRADIENT -BAO GOÀM HEÄ GRADIENT AÙP SUAÁT THAÁP VAØ HEÄ GRADIENT AÙP SUAÁT CAO -HEÄ GRADIENT AÙP SUAÁT CAO (HIGH PRESSURE GRADIENT: HPGE) COÙ ÑOÄ CHÍNH XAÙC THAØNH PHAÀN PHA ÑOÄNG CAO HÔN NHÖNG THIEÁT BÒ ÑAÉT HÔN VÌ TOÁI THIEÅU CAÀN 02 BÔM SAÉC KYÙ LOÛNG -HEÄ GRADIENT AÙP SUAÁT THAÁP (LOW PRESSURE GRADIENT : LPGE) COÙ ÑOÄ CHÍNH XAÙC THAØNH PHAÀN PHA ÑOÄNG THAÁP HÔN NHÖNG CHÆ CAÀN MOÄT BÔM LC COÙ THEÅ TROÄN VAØ THAY ÑOÅI 04 DUNG MOÂI KHAÙC NHAU. HEÄ GRADIENT AÙP SUAÁT CAO HEÄ GRADIENT AÙP SUAÁT THAÁP
17. BOÄ TIEÂM MAÃU -DUØNG ÑEÅ ÑÖA MAÃU VAØO HEÄ THOÁNG -GOÀM VALVE 6 COÅNG -CÔ CHEÁ HOAÏT ÑOÄNG NHÖ SAU : + VALVE TIEÂM MAÃU COÙ VOØNG MAÃU (LOOP) COÙ THEÅ TÍCH COÁ ÑÒNH (THÖÔØNG 20 uL) LOOP DUØNG SYRING BÔM MAÃU VAØO VOØNG CHÖÙA MAÃU ÔÛ VÒ TRÍ LOAD
18. BOÄ TIEÂM MAÃU (tt) ÔÛ VÒ TRÍ LOAD, THEÅ TÍCH MAÃU CAÀN KHI CHUYEÅN VEÀ VÒ TRÍ INJECT, THIEÁT SEÕ GIÖÕ TRONG LOOP, PHAÀN DÖ MAÃU TÖØ LOOP SEÕ ÑÖÔÏC BÔM SEÕ THAÛI RA NGOAØI. VAØO HEÄ THOÁNG ÑEÅ VAØO COÄT TAÙCH ÑIEÀU NAØY GIUÙP THEÅ TÍCH MAÃU TIEÂM VAØO MAÙY LUOÂN GIOÁNG NHAU
19. ÑAÀU DOØ (DETECTOR) -QUAN TROÏNG NHAÀT LAØ ÑAÀU DOØ UV – VIS -NGUYEÂN TAÉC GIOÁNG NHÖ MAÙY ÑO UV-VIS THOÂNG THÖÔØNG -TUY NHIEÂN CELL ÑO PHAÛI COÙ THEÅ TÍCH NHOÛ (DÖÔÙI 20 uL) ÑEÅ PEAK KHOÂNG BÒ DOAÕN CHAÂN VAØ PHAÛI CHÒU ÑÖÔÏC AÙP SUAÁT CAO ÑEÅ KHOÂNG BÒ BEÅ
20. ÑAÀU DOØ (DETECTOR) -TUØY MUÏC ÑÍCH MAØ NHIEÀU ÑAÀU DOØ KHAÙC NHAU ÑÖÔÏC SÖÛ DUÏNG : + ÑAÀU DOØ HUYØNH QUANG ÑEÀ PHAÂN TÍCH ALFLATOXIN, MYCOTOXIN, AMINO ACID, THUOÁC TRÖØ SAÂU HOÏ CARBAMATE + ÑAÀU DOØ CHÆ SOÁ KHUÙC XAÏ (RI) DUØNG ÑEÅ ÑO CAÙC LOAÏI ÑÖÔØNG ÑÔN, ÑÖÔØNG KEÙP + ÑAÀU DOØ ÑOÄ DAÃN ÑEÅ XAÙC ÑÒNH CAÙC ION VOÂ CÔ, HÖÕU CÔ + ÑAÀU DOØ KHOÁI PHOÅ (MS) ÑEÅ XAÙC ÑÒNH PHAÀN LÔÙN CAÙC HÔÏP CHAÁT HÖÕU CÔ + CAÙC LOAÏI ÑAÀU DOØ KHAÙC ÑAÀU DOØ ÑOÄ DAÃN ÑAÀU DOØ ÑIEÄN HOÙA ÑAÀU DOØ ELSD
21. CAÙC LOAÏI COÄT DUØNG TRONG SAÉC KYÙ LOÛNG ☯ RAÁT NHIEÀU NHAÕN HIEÄU COÄT KHAÙC NHAU HIEÄN BAÙN TREÂN THÒ TRÖÔØNG: ÑÖÔÏC CHIA LAØM NHIEÀU LOAÏI THEO MUÏC ÑÍCH SÖÛ DUÏNG, TRONG ÑOÙ CHUÛ YEÁU LAØ : COÄT PHA ÑAÛO RP C18 (ODS) COÄT PHA THÖÔØNG C8 CAÙC LOAÏI COÄT CHUYEÂN DUÏNG CHO TÖØNG NHOÙM CHAÁT. COÄT C18 VAØ C8 ÑÖÔÏC SÖÛ DUÏNG CHO PHAÀN LÔÙN CAÙC HÔÏP CHAÁT THOÂNG THÖÔØNG
22. PHAÂN TÍCH CAÙC AXIT TRONG BIA VÔÙI HEÄ THOÁNG HPLC CHUYEÂN DUÏNG
23. PHAÂN TÍC AXIT BEÙO TRONG THÖÏC PHAÅM VÔÙI ÑAÀU DOØ UV-VIS VAØ HUYØNG QUANG (RF)